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通過擠壓制備大的單層囊泡 (LUVET)

發(fā)布時(shí)間: 2024-01-15  點(diǎn)擊次數(shù): 412次

 

  1. 通過凍干或蒸發(fā)制備干脂質(zhì)混合物

  2. 將擠出機(jī)支架/加熱塊放在熱板上。將溫度計(jì)插入加熱塊中提供的孔中。打開熱板,并使其達(dá)到所需的溫度。讓加熱塊的溫度達(dá)到所需值(大約 15 分鐘)。

  3. 使用合適的緩沖液水合脂質(zhì)混合物 >30 分鐘。在水合和擠出過程中,脂質(zhì)懸浮液應(yīng)保持在脂質(zhì)的相變溫度以上。為了提高水溶性化合物的截留效率,可以通過將樣品瓶交替放置在干冰浴和溫水浴中,使水合脂質(zhì)懸浮液經(jīng)歷3-5次冷凍/解凍循環(huán)。

  4. 一旦樣品全部水合,將樣品裝入其中一支氣密注射器中,并小心地放入微型擠出機(jī)的一端。注意:為了減少死體積,請(qǐng)將裝滿緩沖液的注射器穿過擠出機(jī)來預(yù)潤濕擠出機(jī)部件;丟棄緩沖區(qū)。新注射器可能有緊密的配合部件;為了便于擠出,在將柱塞插入針筒之前,用緩沖劑預(yù)先潤濕注射器針筒和柱塞。

  5. 將空的氣密注射器放入微型擠出機(jī)的另一端。確??兆⑸淦髦O(shè)置為零;當(dāng)脂質(zhì)通過膜擠出時(shí),注射器將自動(dòng)填充。

  6. 在將組裝好的擠出機(jī)設(shè)備放入加熱塊之前,檢查加熱塊的溫度。溫度必須低于80℃,否則注射器會(huì)損壞。注意:擠出機(jī)裝置在插入加熱塊之前必須全部組裝,否則會(huì)損壞。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

  7. 將全部組裝好的擠出機(jī)設(shè)備插入擠出機(jī)支架。插入六角螺母,使任何兩個(gè)相對(duì)的頂點(diǎn)落在垂直平面內(nèi)。使用搖臂夾將注射器與加熱塊保持良好的熱接觸。注意:擠出機(jī)裝置在插入加熱塊之前必須全部組裝,否則會(huì)損壞。

     

     

     

     

     

     

     

     

     

  8. 讓脂質(zhì)懸浮液的溫度與加熱塊的溫度平衡(大約 5-10 分鐘)。

  9. 輕輕推動(dòng)已填充注射器的柱塞,直至脂質(zhì)溶液全部轉(zhuǎn)移到備用注射器中。

  10. 輕輕推動(dòng)備用注射器的柱塞,將溶液轉(zhuǎn)移回原來的注射器。

  11. 重復(fù)步驟 9 和 10 至少 4 次(總共 10 次穿過膜)。一般來說,通過膜的次數(shù)越多,脂質(zhì)溶液變得越均勻。

  12. 最終的擠出物應(yīng)填充備用注射器。這是為了減少被較大顆粒或異物污染的機(jī)會(huì)。

  13. 脂質(zhì)懸浮液應(yīng)開始澄清,產(chǎn)生稍微渾濁的透明溶液。霧度是由于懸浮液中殘留的大顆粒引起的光散射造成的。

  14. 最終擠出后,從加熱塊上取下微型擠出機(jī)。

  15. 從擠出機(jī)中取出已填充的注射器,并將脂質(zhì)溶液注入干凈的樣品瓶中。重要提示:取出注射器時(shí),請(qǐng)將注射器直接從擠出機(jī)中拉出;以一定角度取出可能會(huì)導(dǎo)致注射器破裂。

  16. 實(shí)驗(yàn)期間將囊泡制劑儲(chǔ)存在脂質(zhì)的轉(zhuǎn)變溫度以上。不使用時(shí),將囊泡溶液儲(chǔ)存在 4°C 下。不要凍結(jié)。在 4°C 下儲(chǔ)存時(shí),囊泡溶液在水性介質(zhì)中不能穩(wěn)定超過 3-4 天。在較高溫度和 pH 8 下儲(chǔ)存囊泡溶液可能會(huì)縮短囊泡懸浮液的壽命。

  17. 在使用新的脂質(zhì)制劑之前全部清潔儀器。

 

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